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荧光标记服务

什么是荧光标记

  荧光标记(Fluorescent labeling)是一种广泛应用于生命科学领域的技术,用于追踪和定位目标生物分子的代谢和运动轨迹。通过将荧光染料与目标分子特异性地结合,荧光标记使得目标分子在显微镜下呈现出明亮的荧光信号,从而实现对生物过程的实时观察与定量分析。

  荧光标记所依赖的化合物称为荧光物质。荧光物质是指具有共轭双键体系化学结构的化合物,受到紫外光或蓝紫光照射时,可激发成为激发态,当从激发态恢复基态时,发出荧光。利用荧光标记分子,将其共价结合在一些分子识别物质(比如酶、抗原/抗体、DNA、适配体、多肽等)上作为探针,分子识别物质与被检测的对象(比如蛋白、多肽等)进行反应之后,根据荧光标记分子在反应前后的荧光强度变化,对被检测对象进行各种定量的分析。

荧光标记优点

    1、荧光标记的无放射物污染,操作简便

    2、高灵敏度和空间分辨率

    3、可视化等

    这些优点,使得荧光标记物在许多研究领域的应用日趋广泛。

常见的荧光染料

1、香豆素系列:

香豆素和香豆素衍生物是紫外线可激发的蓝色荧光染料,其发射波长范围约为390至480nm。用途最广泛的香豆素包括AMCA,7-氨基香豆素(AFC和AMC),7-羟基香豆素和7-甲氧基香豆素的衍生物。

香豆素类荧光染料分子量很小,可紫外激发,一般发蓝色荧光(emission range ~410 to 470 nm),常常作为多色荧光靶标实验中蓝光染料。由于价格便宜,个头小,香豆素类染料常常用于标记酶底物,从而可在细胞中,溶液中检测酶活性

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2、罗丹明系列:

罗丹明染料分子的激发波长通常在500-600nm之间,而发射波长在550-750nm之间。此外为了更适应生物荧光成像,可以通过改变其结构和偶联元素使其吸收和发射红移,进而衍生了一系列近红外罗丹明染料。罗丹明可以覆盖绿色到红色广泛的光谱,其中橙色荧光的四甲基罗丹明最常见,最常用。

罗丹明是3′,6’双胺化的呫吨类(Xanthene)荧光染料。相对于荧光素染料(羟化呫吨),罗丹明(胺化呫吨)的荧光具有更好的pH稳定性,并且胺化染料更容易结构多样化,不同结构会得到不同波长和颜色的荧光,因此罗丹明类染料可选用的荧光颜色更多,很多染料有比荧光素波长更长的荧光,是荧光素的有力补充。利用荧光素和各种罗丹明的组合,可以实现各种多色彩染色,标记,追踪,常常用于DNA测序,荧光免疫,微阵列的各种生物实验中。罗丹明特别适合核酸分子标记,也可以用于dextran等高分子的标记。由于大多数罗丹明水溶性差,标记蛋白时容易产生蛋白聚集,荧光淬灭等问题,需注意或者选择其它荧光分子。

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3、荧光素FITC系列:

FITC系列荧光染料的激发波长为495nm左右,发射波长为520nm左右绿色荧光。常用的FITC系列有FITC,5-羧基荧光素,6-羧基荧光素,氨基荧光素等。荧光素(fluorescein)是最早使用,最经济实惠,也是使用最广泛的荧光染料之一。它的两种形式FAM (fluorescein amidite)和FITC (fluorescein isothiocyanate)常常见诸于文献报道中。荧光素有很多优点:它量子产率很好,高达到0.94,因此初亮度非常明亮;它的水溶性很好,和蛋白偶联不会产生沉淀问题;它的激发峰是494nm,和常用的激光束488nm(argon-ion laser)很匹配。它的弱点是光稳定性欠佳,长时间照射荧光易淬灭,另外它的荧光对pH敏感,在偏酸性条件下荧光变弱。

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4、CY系列

Cy系列荧光染料包括Cy3、Cy5、Cy7等,它们的激发波长和发射波长略有不同。Cy3的激发波长为550nm左右,发射波长为570nm左右;Cy5的激发波长为650nm左右,发射波长为670nm左右;Cy7的激发波长为750nm左右,发射波长为770nm左右。这些荧光染料常用于荧光免疫分析、荧光探针检测、荧光染色以及生物荧光标记等领域。Cy系列荧光染料具有优异的光学性质和稳定性,能够提供高灵敏度和高特异性的检测结果,因此在生物医学研究中得到了广泛应用。Cy(Cyanine)是一系列非常常用的荧光化合物。它们荧光比FITC,罗丹明等更亮更稳定,在工业和生物技术中已有很多年的使用历史。基于不同的化学结构,Cy染料的荧光可以覆盖从紫外到近红外几乎所有光谱。

a、Cy2是一种发射绿色荧光的染料,光学性质与罗丹明绿、FITC、AF488类似

b、Cy3 (Cyanine 3) 是一种发橘黄色荧光的花青素荧光染料

c、Cy5是明亮的红色荧光染料。由于它的激发和发射峰都在长波长红光区,而在这个区域生物样品的自身荧光较弱,因此,相对于Cy3,Cy5具有明显的灵敏度优势。

d、Cy7 属近红外荧光染料,它发射的荧光肉眼不可见但是可以被大多数荧光仪器识别

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5、BODIPY系列

BODIPY染料可覆盖所有的可见光光谱范围,与各种仪器的参数都相匹配。 和AF系列,Cy系列染料一样,硼二吡咯系列染料荧光明亮,消光系数高,光稳定性好。确定是价格昂贵


我们提供的服务

1、荧光标记小分子药物——药物、小分子、抑制剂、医药中间体、生物活性小分子等

2、荧光标记氨基酸——氨基酸与聚氨基酸等

3、荧光标记糖类 ——单糖、多糖、聚糖、寡糖、脂多糖、琼脂糖、核糖、葡聚糖、甘露糖、糖醇等

4、荧光标记高分子——壳聚糖、淀粉、透明质酸、玻尿酸、葡聚糖等

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