图片来源：Angew. Chem. Int. Ed.
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有鉴于此，以2-氯丙二酸二乙酯和肉桂醛为底物，对不对称环丙烷化反应酶4-OT进行进一步工程化改造，结果显示，4-OT双突变体M45V/F50A相较于野生型比酶活提高了30倍。
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将筛选出来的有益突变体M45V/F50A用于2-氯丙二酸二乙酯和多种不同的α,β-不饱和醛环丙烷化反应，结果显示，4-OT M45V/F50A能促进两个新碳-碳键的形成，对两个立体中心具有良好的立体控制，可提供所需的非对映体和对映体纯度高的环丙烷（d.r.高达25:1；e.r.高达99:1）。
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总之，该项研究结果显示混杂酶在扩大非自然反应的生物催化范围方面的积极作用。
参考文献：Biocatalytic Asymmetric Cyclopropanations via Enzyme-Bound Iminium Ion Intermediates
Angew. Chem. Int. Ed.
DOI:10.1002/anie.202110719
原文作者：Andreas Kunzendorf, Guangcai Xu, Mohammad Saifuddin, Thangavelu Saravanan, and Gerrit J. Poelarends*
