一、产品简介

    邻近标记技术已被成功应用于鉴定蛋白靶标,相比传统的Pulldown/IP+MS技术,邻近标记技术可以解决鉴定弱或瞬时相互作用、研究膜蛋白等诸多问题。根据结核分枝杆菌类泛素蛋白酶体系统中底物Pup分子在体外能够招募PafA连接酶发挥邻近标记作用的实验原理，来自上海交通大学的科研团队研发了一项基于底物的新型邻近标记技术(专利号ZL202110069353.7),命名为Specific Pupyla-tion as IDEntity Reporter(SPIDER)。该技术可应用于蛋白-蛋白、核酸-蛋白、小分子-蛋白等相互作用的验证和发现。

    本试剂盒基于SPIDER邻近标记技术,仅需准备生物素化标记的诱饵分子,加入待反应样本(纯化蛋白、细胞/组织裂解液)及SPIDER反应体系启动反应,诱饵分子(Bait)和目标蛋白(Prey)之间的非共价结合被转化为目标蛋白和链霉亲和素之间的共价连接，随后目标蛋白可以被生物素琼脂糖亲和富集并进行质谱鉴定。相比其他互作检测产品,该方法无需提前将标签和诱饵分子进行融合,摆脱对融合蛋白表达准确性的依赖，操作相对简单，应用范围广。此外,该产品后续使用严苛的条件进行清洗,可显著降低非特异蛋白的干扰,富集能力强,结果准确性更高,同时兼具操作简单快捷的优点。

二、产品应用范围

用于小分子、重组蛋白的结合蛋白/靶标蛋白的筛选和发现

仅适用于体外反应

仅用于科学研究

四、需要您自行准备的主要试剂、耗材和仪器

1.生物素标记的小分子/重组蛋白

1)生物素标记的小分子/重组蛋白:4rxns共需2.4nmol,建议最小浓度为10 μM; 生物素标记位点尽量在最低程度上影响小分子/蛋白活性。

特别提示:

生物素与小分子/重组蛋白之间需要柔性Linker,建议2~3个PEG,防止重组蛋白影响生物素与链霉亲和素的结合,或者生物素影响重组蛋白/小分子表面构象与活性。

2)非标记小分子(重组蛋白无需准备):2rxns共需120 nmo,建议最小浓度为1mM。

2.细胞/组织裂解液

4 rxns共需细胞/组织裂解液中总蛋白12 mg,建议最小浓度为1 mg/mL。

特别提示:

细胞裂解时,Cell Lysate Buffer的有效成分建议使用非离子型去污剂,如1%NP-40,其作用温和，能够保留蛋白的天然构象以及相互作用;酶抑制剂应避免使用AEBSF或带有AEBSF组分的Cocktai，AEBSF会抑制SPIDER反应。

3.其它需要的主要试剂

Tween 20:共需40 μL,可完成4 rxns。

4.耗材

15 mL离心管,1.5 mL EP管,一次性吸头。

5.仪器

可用于500xg的微量离心机，以及15mL离心管，500xg的水平离心机;涡旋振荡器，旋转混匀器(水平混匀器、三维混匀器可作为备选);37℃水浴锅，4℃冰箱。

如有需要可联系我们：

电话：021-58952328

Q Q：3599547900 ；2087788560