体外酶法催化是获得糖链的有效策略之一，但糖酶通常稳定性较差，在高温及长时间反应中易絮凝失活。固定化酶是增强酶催化工程属性的有效手段，其中，金属有机框架材料（metal‒organic framework，MOF）因其高孔隙率、高稳定性、高生物相容性的优点，是固定化酶的优良载体，能显著提升酶在酸碱、高温、有机溶剂等极端环境下的稳定性。

与通过共沉淀法把酶包埋在微孔MOF中相比，将酶负载于孔径较大的介孔MOF更有利于固定化酶在催化反应中传质效率的提升。但介孔MOF的合成条件苛刻，通常需要强酸和高温环境，不利于酶活性的保持，所以通过孔道负载法更为可靠。然而，大多数酶的尺寸都大于5 nm，但合成稳定介孔MOF（孔径≥ 2 nm）仍是一项重大挑战。因次，在MOF中创造缺陷是负载大尺寸酶的一种有效策略。

近期，南京大学袁帅教授和南京师范大学张幸教授合作，在一种稳定的介孔MOF（PCN-333）中通过后修饰引入动态配体来创造缺陷，从而拓展了PCN-333中孔笼介孔的窗口尺寸，实现了一系列尺寸大于5 nm的糖酶的高效负载与催化。

作者通过将PCN-333中稳定的三嗪配体与不稳定的硼醚配体进行部分交换，合成了具有动态硼醚键的PCN-333-TBTB。在吸附酶的过程中，硼氧键的解离平衡产生了动态缺陷，从而扩大了PCN-333-TBTB的窗口和空腔尺寸。因此，这种方法不仅加快了小尺寸酶（Cyt C和HRP）的吸附动力学，还能提高各种大尺寸糖酶的吸附量。

此外，PCN-333-TBTB在较大尺寸底物的酶催化反应中也体现出了优势。在固定化肝素合酶（Pasteurella multocida heparosan synthase 2，PmHS2）催化二糖转化为三糖的反应中，与微孔的ZIF-90相比，PmHS2@PCN-333-TBTB的催化效率和转化率更高。

同时，该策略具有良好的通用性，作者利用PCN-333-TBTB实现了8种大尺寸糖酶（蔗糖合酶、尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶、N-乙酰氨基己糖激酶、葡糖胺-1-磷酸尿苷酰转移酶、肝素合酶、软骨素合酶、唾液酸转移酶、β1, 3-N-乙酰葡萄糖胺转移酶）的高效负载，搭建了3套多酶共固定化级联催化体系，成功合成了5种糖胺聚糖寡糖和2种母乳寡糖，催化转化率均高于99%。作者还构建了五种酶共固定化的体系，实现了从单糖一锅法合成糖胺聚糖多糖，显示了PCN-333-TBTB载体在大尺寸底物的催化反应中优势。这些结果表明，PCN-333-TBTB 平台具有多功能性、生物兼容性和高效性，可用于各种不稳定的大尺寸酶。

综上，该策略通过引入硼醚配体显著增加了MOF中的动态缺陷，从而加快了酶的吸附速度，提高了酶的负载量及其催化速度和转化率，且可固定化的酶尺寸超过了MOF的固有孔径。这一策略将拓宽MOF材料在酶和酶反应中的应用范围，为酶固定化技术的新发展提供思路。