分享一篇发表在Analytical Chemistry上的文章，题目为“Gas Phase Separation of Modified Peptides for Activity-Based Protein Profiling”，通讯作者是来自康奈尔大学的Jacob B. Geri教授，他在学士、博士期间研究无机化学和有机化学，在博士后期间及之后则研究高通量、时空分辨的蛋白质相互作用新技术。本文开发了一种气相分离技术用于ABPP分析。

分析反应性蛋白质组对了解生理病理过程是至关重要的，其中最常用的技术是ABPP技术。由于蛋白质组学样品中蛋白质丰度差异很大，质谱硬件的分析速度有限，因此对少量样品进行活性分析仍然是具有挑战性的。

为了在位点水平分析蛋白质组反应性，通常需要在大量未修饰肽中分辨修饰肽信号。传统的方法使用链霉亲和素珠等固体介质来富集修饰肽，作者认为这种方法操作繁琐且会造成分析物损失。本文开发了一种替代方法timShift，该方法是一种基于气相的分离手段，用于增强反应性位点分析。作者衍生了常用的碘乙酰胺炔基探针，使其能够增加标记肽的离子迁移率，在淌度分析过程中将修饰肽和未修饰肽分开，并能在蛋白质组中进行靶向测序和定量。

作者提出可以增加肽的电荷来增加其离子迁移率，从而可以在淌度分离过程中进行分离，为此，作者筛选了多种候选试剂，其中下图展示的这种官能团可以使修饰肽区域（红色）与非修饰肽区域（黑色）实现最好的分离，因此作者选择了这种迁移试剂。

作者使用该方法鉴定了多于8,200个反应性半胱氨酸位点，并在低至20ug的起始量的前提下证明该方法相比于脱硫生物素-链霉亲和素富集具有更高的灵敏度。

作为应用，作者用特定靶标Pin1的特异性共价抑制剂磺胺类药物对timShift进行评估，展示了反应性半胱氨酸数据，与此前的报道相符。另外，作者在96孔板中对31个选择性亲电子试剂进行了高通量筛选，展现了方法的便捷、快速的特点。

总之，本文提出了一种基于气相的分离手段，可以代替链霉亲和素珠等分离步骤，在ABPP实验中有很好的效果。

本文作者：WYJ

责任编辑：LYC

DOI：10.1021/acs.analchem.5c03300

原文链接：https://doi.org/10.1021/acs.analchem.5c03300