分享一篇发表在RSC Chem Bio上的文章，题目为“Convergent construction of N-terminally modified CCL5 chemokines for photoaffinity receptor pull-down using cross-aldol bioconjugations”，通讯作者是来自英国约克大学的Nathalie Signoret和Martin A. Fascione教授，研究方向是趋化因子受体相关的分子传感器和糖化学。
趋化因子CCL5（又称RANTES）通过与G蛋白偶联受体CCR5结合，参与免疫细胞的迁移和炎症反应。然而，CCR5也是HIV-1病毒进入宿主细胞的重要共受体。因此，开发能够阻断CCL5与CCR5相互作用的拮抗剂，是抗HIV研究的重要方向。在此前的研究中，N端修饰的CCL5类似物（如AOP-RANTES和PSC-RANTES）表现出良好的抗病毒活性，但它们的合成通常依赖不稳定的肟键或全合成，存在体内稳定性差或合成复杂的问题。因此，亟需一种高效、稳定、可模块化的化学修饰方法，用于构建功能化的CCL5类似物并研究其与CCR5的相互作用。
作者采用了一种名为OPAL（Organocatalyst-mediated Protein Aldol Ligation）的交叉醛缩合生物偶联方法，用于在CCL5的N端引入稳定的碳–碳键。在该方法中，作者使用重组表达系统在大肠杆菌中表达CCL5的P2G突变体用于避免醛基环化的副反应，并通过非变性条件下切割SUMO标签，获得正确折叠的CCL5蛋白。随后，作者利用高碘酸氧化CCL5 N端的丝氨酸，生成α-氧代醛（α-oxo aldehyde）官能团作为后续反应的受体。接着，在有机催化剂（如脯氨酰胺）的存在下，CCL5与不同的醛类供体（如丁醛、壬醛、芳香醛等）进行交叉醛缩合反应，形成稳定的碳–碳键。当使用4-叠氮苯乙醛作为供体，引入光敏基团，构建可用于光交联的CCL5探针。最后，作者也通过链霉亲和素磁珠进行下拉实验，验证了其在哺乳动物细胞中对CCR5的捕获能力。
总的来说，在本文中作者发展了一种对趋化因子CCL5进行N端修饰的方法，通过氧化和交叉醛缩合反应在N端通过稳定的碳碳键引入修饰，实现了可用于光交联的CCL5探针的构建以及其受体的捕获。
本文作者：WYQ
责任编辑：LYC
DOI：10.1039/d5cb00162e
原文链接：https://doi.org/10.1039/d5cb00162e
