介绍一篇发表在Angew. Chem. Int. Ed.上的文章，题目为“Unsaturated Phosphorus Electrophiles to Probe Protein Tyrosine Phosphatases”，通讯作者是德国莱布尼茨分子药理学研究所的Christian P. R. Hackenberger教授，课题组的研究方向包括蛋白质翻译后修饰等。

酪氨酸磷酸化是一种重要的蛋白质翻译后修饰，其调控依赖于蛋白酪氨酸激酶（PTKs）和磷酸酶（PTPs）的协同作用。PTP是最大的磷酸酶家族，都具有HCX5R的特征催化motif，其中的半胱氨酸残基是催化所必需的亲核试剂。由于PTP催化位点的高度保守性，为其开发高选择性的工具和药物面临挑战。ABPP是研究蛋白活性的有力工具，但目前现有的PTP探针具有选择性有限、合成复杂等问题。因此，作者希望发展一种基于多肽的高选择性共价PTP探针。

作者选择了乙炔基磷酰胺酸（PN）和乙炔基膦酸（PO）作为与半胱氨酸共价反应的warhead，在生理pH下，磷酸基团会发生去质子化，导致P上的电子密度提高，乙炔基的亲电性减弱，使其适合作为ABP的反应warhead。在合成上，可以分别通过两步反应以较高的产率将PN和PO基团引入到底物肽的特定酪氨酸残基上。

在概念验证阶段，作者选择PTP1B与其已知的底物肽（源自EGFR的988-998位氨基酸，序列DADEpYLIPQQG）作为研究对象。PO和PN探针均可以在生理pH及细胞裂解液中稳定存在，而探针并不能与GSH发生反应，表明其反应性是受到限制的。使用重组PTP1B进行共价标记实验，发现PO探针可以在4小时内完全标记蛋白，而PN探针需要20小时且效率仅为80%，而对照的小分子无标记信号，表明肽段序列对于导向十分重要。此外，标记主要发生在催化性半胱氨酸Cys215上，对其他含半胱氨酸蛋白无标记信号，表明探针具有较好的选择性。

之后，作者在HEK293T、MCF-7、Ramos细胞裂解液中进行了测试。PO探针显示出了对PTP1B的选择性标记，在WB与蛋白质组学层面均能较为特异地富集内源的PTP1B。

总之，本文发展了一类基于底物肽的不饱和磷探针，用于特异性捕获酪氨酸磷酸酶。

本文作者：YAQ

责任编辑：TYC

DOI：10.1002/anie.202521902

原文链接：https://doi.org/10.1002/anie.202521902